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DNA凝膠回收試劑盒(N1071-N1072-N1073)

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N1071(50次) N1072(100次) N1073(200次)

DNA凝膠回收試劑盒

 

產品組分

 

貨號

N1071

50次)

N1072

100次)

N1073

200次)

溶液BD

20 ml

40 ml

80 ml

溶液PE

15 ml

15 ml×2

20 ml×3

溶液Eluent

2.5 ml

5 ml

10 ml

DNA純化柱

50

100

200

說明書

1

1

1


溶液PE初次使用前用無水乙醇按1: 4稀釋,即含80%乙醇。

溶液BD中含有變性劑,請不要直接接觸皮膚。

上述產品組分均可單獨購買,詳見產品索引。

產品說明

本產品采用了經典的硅膠膜技術,用于從瓊脂糖凝膠中回收DNA片段(50 bp-10 kb),也適合從PCR產物、酶促反應液中回收DNA,也可用于基因組DNA等樣品的純化。其純化原理是含有目的片段的瓊脂糖凝膠溶解后,硅膠膜柱高效可逆地吸附體系中的DNA片段(高鹽、低pH值),蛋白及其它雜質不被吸附而被除去,被吸附的DNA片段在低鹽、高pH值條件下再被洗脫純化。一次可回收30μg高純度DNA片段,此DNA片段可直接用于各種酶促反應等。

 

質量控制

1 % TAE瓊脂糖凝膠中純化50 bp1,000 bp10,000 bpDNA片段。

 

保存條件

室溫保存2年。

 

注意事項--------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

溶液PE第一次使用前請按瓶上標簽加入4倍體積的無水乙醇,即15 ml溶液PE中加入60 ml無水乙醇,20 ml溶液PE中加入80 ml無水乙醇,使用后立即蓋緊蓋子。

本產品對電泳使用的瓊脂糖種類沒有嚴格限制。為了保證回收DNA的質量和回收效率,盡量使用高純度的瓊脂糖。

電泳時請使用新鮮配制的TAE電泳緩沖液,以免影響電泳及回收效果。TBE電泳緩沖液中的硼酸與瓊脂糖相互作用生成的復合物會影響DNA的回收效率,因此TBE凝膠電泳不適合用于DNA回收。

請適當延長電泳時間,在條帶分離清晰后進行切膠回收,以免回收到多余雜帶。

為提高DNA回收收率,切膠時應盡量除去多余的膠塊。

本試劑盒純化柱的DNA吸附能力強。但如果DNA濃度小或DNA初始量少,回

收率將會偏低。

溶液Eluent10 mM Tris-HCl, pH 8.5)中不含EDTA,其收集的DNA片段可直

接用于各種酶促反應等,不會影響后續試驗。

為了保證回收效率,請不要使用未調整pH值的超純水洗脫目的片段。

請嚴格按照操作步驟操作。


操作步驟--------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

切取含有目的DNA片段的瓊脂糖凝膠條帶。

盡量切除不含有目的DNA部分的凝膠,減少凝膠體積,提高DNA回收率。

切膠時,請使用長波長UV360 nm)光盒。且不要將DNA長時間暴 露在紫外燈下,以防DNA損傷。

稱取凝膠的重量,近似地確定其體積。

凝膠重量的稱量方法:取1.5 ml2 ml離心管,用電子天平稱其初質量,切膠裝在離心管后稱終質

量,兩者差即為膠的質量。不同離心管的重量有差異,因此,每個離心管的重量需單獨稱量。

按照每100 mg瓊脂糖凝膠對應100 μl溶液BD的比例,向離心管中加入溶液BD

4  55℃-65℃水浴7-10min,直至凝膠完全融化。期間需要顛倒混合3次。

瓊脂糖必須完全融化,以免堵塞柱子,嚴重影響DNA片段的回收效率。

如果總體積大于500 μl,可適當增加溶膠時間。

若此時溶液變紅,可加10 μl 3M NaAcpH 5.2)。

如要從反應液中回收DNA,則向反應液中加入等體積的BD,充分混勻,后續步驟相同:

將步驟4所獲溶液置于DNA純化柱中,靜置2min

膠塊完全溶解后最好將膠溶液溫度降至室溫再上柱,因為純化柱在較高溫度時結合DNA的能力     較弱。

●  如果所獲溶液過多,超過DNA純化柱容積(700 μl),可分次加入DNA純化柱中。

6  12,000 rpm離心1min。若溶液體積大于DNA純化柱的容積,可分兩次離心,棄濾液。

此時DNA片段被吸附于DNA純化柱中的硅膠膜上。

加入500 μl溶液PE12,000 rpm, 離心1min,棄濾液。

溶液PE初次使用前用無水乙醇按1: 4稀釋,即含80%乙醇。

此步驟的作用是將硅膠膜上吸附的蛋白、鹽等雜質洗脫,以獲得高質量的DNA片段。

加入500 μl溶液PE12,000 rpm, 離心1min,棄濾液。

9  12,000 rpm離心3min,以徹底去除純化柱中的液體。

此步驟的作用是去除殘留乙醇,避免影響后續酶促反應。同時也利于DNA片段的充分溶解。

10  將離心柱置于新的1.5 ml離心管中。向純化柱的中央處,懸空滴加30-100 μl溶液Eluent60℃預熱),靜置2min12,000 rpm 離心1min,管底即為目的DNA片段。貯存于-20℃

溶液Eluent可用無菌雙蒸水代替,但其pH需為8.0-8.5,加入體積視DNA目的片段的多少、 用戶對目的片段濃度要求而定。

對溶液Eluent 65℃預熱,會提高提取DNA目的片段的產量。



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